Reverse Transkription

Die Taq-Polymerase ist eine DNA-abhängige DNA-Polymerase, mit anderen Worten, sie kann nur DNA als Matrize verwenden. Sollen aber RNA-Moleküle nachgeweisen werden, entweder zelluläre oder virale RNA (z. B. aus Hepatitis C-Viren), muß ein Kunstgriff helfen: Die reverse Transkription (RT).

Die Bezeichnung kommt daher, daß ein zellulärer Prozeß, die Transkription, bei dem nukleäre DNA über RNA-Zwischenstufen zur eigentlichen cytoplasmatischen RNA abgelesen (transkribiert) wird, umgekehrt beschritten wird. Manche Viren besitzen ein RNA-Genom, welches zu ihrer Vermehrung innerhalb einer eukaryontischen Zelle in DNA-Zwischenstufen übersetzt werden muß, damit die zellulären DNA-abhängigen RNA-Polymerasen des Wirtes neue Virus-RNA-Moleküle produzieren können. Daher besitzen diese Viren notwendigerweise eine reverse Transkriptase (eine RNA-abhängige DNA-Polymerase), da dieses Enzym in eu- und prokaryotischen Zellen nicht vorkommt.

Nach der in vitro in Gegenwart eines spezifischen Primers, des Enzymsubstrates (Triphosphatnukleotide dATP, dCTP, dGTP und dTTP) und bei geeigneten chemischen Bedingungen durchgeführten reversen Transkription entstehen so neu synthetisierte, zur Matrizen-RNA komplementäre DNA-Einzelstränge, die anschließend in eine Standard- oder nested PCR zur weiteren Analyse eingesetzt werden können.

Dieses Enzym wird hauptsächlich rekombinant hergestellt und ist in verschiedenen Modifikationen für unterschiedlichste Applikationen kommerziell verfügbar.